L Wnt-3A小鼠皮下結締組織細胞

L Wnt-3A細胞是一種來源於(yu) 小鼠皮下結締組織的細胞係，具有成纖維細胞樣形態。L Wnt-3A細胞從(cong) 100日齡雄性小鼠的乳暈脂肪組織中分離出來，並經過特定基因修飾以表達Wnt-3A基因。L Wnt-3A細胞因其能夠分泌具有生物活性的Wnt-3A蛋白，成為(wei) 生產(chan) Wnt-3A條件培養(yang) 基的最佳來源。

L Wnt-3A細胞係是通過在L-M(TK-)細胞中轉染Wnt-3A表達載體(ti) 並使用G418篩選出穩轉株而獲得。L Wnt-3A細胞屬於(yu) 小鼠C3H/An品係。由於(yu) Wnt-3A條件培養(yang) 基除了含有Wnt-3A蛋白外，還包含其他因子，因此在相關(guan) 實驗中必須使用來自親(qin) 本細胞係的對照條件培養(yang) 基，以確保實驗結果的準確性。

L Wnt-3A皮下結締組織細胞特性特征

• Wnt-3A蛋白分泌：L Wnt-3A細胞能分泌具有生物活性的Wnt-3A蛋白。
  

• 糖蛋白性質：Wnt-3A是一種分泌性糖蛋白，具有多種信號功能。

• Wnt-3A基因表達：這些細胞穩定表達Wnt-3A基因。
  

• 基因功能：Wnt-3A基因編碼的蛋白在胚胎發育過程中控製多種模式形成和生長事件。

• 穩定表達：L Wnt-3A細胞是通過轉染Wnt-3A表達載體(ti) 並在含G418的培養(yang) 基中篩選出的穩轉株，因此能持續穩定地表達Wnt-3A。

• 條件培養(yang) 基產(chan) 生：這些細胞是生產(chan) Wnt-3A條件培養(yang) 基的最佳來源

L Wnt-3A細胞參數表

L Wnt-3A小鼠皮下結締組織細胞培養教程

L Wnt-3A細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出L Wnt-3A細胞凍存管，迅速放入37℃的水浴中，輕輕搖動1-2分鍾，直至細胞完全融化。

• 將L Wnt-3A細胞懸液轉移到含10 mL預熱完全培養(yang) 基的15 mL離心管中。

• 在1000 rpm下離心5分鍾，棄去上清。

• 用5 mL完全培養(yang) 基重懸L Wnt-3A細胞。

• 將細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶中，放入37℃，5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) L Wnt-3A細胞。

日常培養

• 每1-2天觀察L Wnt-3A細胞的生長狀況，根據生長速度決(jue) 定換液頻率。

• 通常每2-3天更換一次L Wnt-3A細胞的培養(yang) 基。

• 棄去舊培養(yang) 基後，用PBS輕輕衝(chong) 洗L Wnt-3A細胞1-2次。

• 加入新鮮預熱的完全培養(yang) 基。

L Wnt-3A細胞傳代

• 當L Wnt-3A細胞密度達到70%-80%時進行傳(chuan) 代：

• 棄去培養(yang) 基，用PBS輕輕衝(chong) 洗L Wnt-3A細胞1-2次。

• 加入適量0.25%胰酶-EDTA溶液，37℃孵育1-2分鍾。

• 在顯微鏡下觀察，當L Wnt-3A細胞變圓並開始脫落時，輕拍培養(yang) 瓶。

• 加入等體(ti) 積含血清的培養(yang) 基終止消化。

• 將L Wnt-3A細胞懸液轉移至15 mL離心管中，1000 rpm離心5分鍾。

• 棄去上清，用新鮮培養(yang) 基重懸L Wnt-3A細胞。

• 按1:2或1:3的比例將L Wnt-3A細胞接種到新的培養(yang) 瓶中。

L Wnt-3A細胞凍存

• 收集對數生長期的L Wnt-3A細胞。

• 按傳(chuan) 代方法收集L Wnt-3A細胞。

• 用凍存培養(yang) 基（含10% DMSO）重懸L Wnt-3A細胞，調整細胞密度至1-2×10^6/mL。

• 將L Wnt-3A細胞懸液分裝至凍存管中，每管1 mL。

• 將凍存管放入程序降溫盒中，置於(yu) -80℃冰箱中過夜。

• 次日將L Wnt-3A細胞凍存管轉入液氮中長期保存。

Wnt-3A條件培養基製備

• 培養(yang) L Wnt-3A細胞：使用含G418的完全培養(yang) 基在37℃，5% CO₂環境下培養(yang) L Wnt-3A細胞。

• 收集培養(yang) 基：當L Wnt-3A細胞達到70-80%匯合度時，更換為(wei) 新鮮的完全培養(yang) 基。

• 分泌期：繼續培養(yang) 3-4天，以便L Wnt-3A細胞分泌Wnt-3A蛋白到培養(yang) 基中。

• 收集和處理：收集L Wnt-3A細胞的培養(yang) 基，並通過離心或過濾去除細胞碎片。

• 濃縮和儲(chu) 存：收集的L Wnt-3A細胞培養(yang) 基可以直接使用或進行濃縮處理；分裝後在-20℃或-80℃儲(chu) 存備用。

• 質量控製：測試Wnt-3A的活性，確保L Wnt-3A細胞培養(yang) 基中含有生物活性Wnt-3A蛋白。

注意事項

• 收到L Wnt-3A細胞後，首次傳(chuan) 代建議在T25培養(yang) 瓶中以1:2的比例傳(chuan) 代。

• 運輸用的培養(yang) 基不應再用於(yu) 培養(yang) L Wnt-3A細胞，需使用新配製的完全培養(yang) 基。

• 如果因運輸振動導致L Wnt-3A細胞脫落，需要離心回收。

• 定期檢查L Wnt-3A細胞是否有汙染或形態異常。

• 所有操作應在生物安全櫃中進行，以確保無菌操作。

• Wnt-3A條件培養(yang) 基中含有其他因子，在實驗中建議使用親(qin) 本細胞株(ATCC CRL-2648)作為(wei) 對照。