
小鼠原代前脂肪細胞
- 來源:脂肪組織
- 細胞特征:貼壁細胞 , 成纖維細胞樣
- 培養(yang) 基:kaiyun网站安全專(zhuan) 用培養(yang) 基
- 其他:在含胰島素、地塞米鬆和異丁基甲基黃嘌呤(IBMX)的分化培養(yang) 基中,前脂肪細胞可分化為(wei) 脂肪細胞,並儲(chu) 存甘油三酯形成脂滴。
小鼠原代前脂肪細胞是從(cong) 小鼠白色脂肪組織(如附睾脂肪、腎周脂肪和皮下脂肪)中分離獲得的一類未成熟脂肪細胞,具有顯著的增殖能力,並可分化為(wei) 成熟脂肪細胞。在形態上,前脂肪細胞呈梭形,隨著分化進程逐步積聚脂滴,最終轉變為(wei) 成熟的圓形成熟脂肪細胞,這些成熟細胞以胞漿中單一大脂滴為(wei) 特征,已喪(sang) 失分裂能力。
前脂肪細胞在體(ti) 內(nei) 外均能分泌多種脂肪因子,參與(yu) 能量代謝、內(nei) 分泌調節和炎症反應,在肥胖及相關(guan) 代謝疾病中發揮重要作用。作為(wei) 脂肪組織中重要的細胞組分,前脂肪細胞不僅(jin) 是研究脂肪組織功能的理想工具,還被認為(wei) 在軟組織修複等領域具有潛在的應用價(jia) 值。
小鼠原代前脂肪細胞特性特征
前脂肪細胞具有增殖能力,能夠在體(ti) 外進行多次分裂,並在適當條件下向成熟脂肪細胞分化。
小鼠原代前脂肪細胞在體(ti) 內(nei) 和體(ti) 外都參與(yu) 能量代謝,並在肥胖及相關(guan) 代謝疾病中發揮重要作用。
標誌物表達:前脂肪細胞因子-1(Pref-1)是其特征性標誌物,顯示為(wei) 陽性。
在分化過程中,前脂肪細胞會(hui) 表達多種與(yu) 脂肪細胞功能相關(guan) 的基因,如PPARγ(過氧化物酶體(ti) 增殖物激活受體(ti) γ)、C/EBPα(CCAAT增強子結合蛋白α)、FASN(脂肪酸合成酶)等,這些基因在脂肪細胞的分化和功能中起關(guan) 鍵作用。
在分化過程中,PPARγ和C/EBPα的表達量通常隨著時間的推移而增加,在前脂肪細胞向成熟脂肪細胞轉變中的重要作用。
其他關(guan) 鍵基因如HSL(激素敏感性甘油三酯脂肪酶)也在分化過程中表現出顯著的表達變化,反映了脂肪代謝的調節機製。
小鼠原代前脂肪細胞不僅(jin) 參與(yu) 能量儲(chu) 存,還通過分泌多種生物活性因子影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nei) 皮功能、纖溶活動及炎症反應等多種生理過程。
由於(yu) 其對外界機械損傷(shang) 的抵抗力較強,前脂肪細胞被認為(wei) 有潛力作為(wei) 軟組織缺損的填充材料
小鼠原代前脂肪細胞參數表
細胞名稱 | 小鼠原代前脂肪細胞(Preadipocytes) |
英文名稱 | Mouse Preadipocyte Cells |
來源 | 小鼠白色脂肪組織(附睾、腎周、皮下脂肪) |
細胞形態 | 梭形,貼壁生長 |
細胞純度 | 高於90% |
鑒定標誌物 | 前脂肪細胞因子-1(Pref-1)免疫熒光染色陽性 |
不含病原體 | 不含HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌 |
培養基 | F12培養基或DMEM/F12,添加10%胎牛血清(FBS)和抗生素(青黴素和鏈黴素) |
培養條件 | 37℃,5% CO₂ |
接種密度 | 1.5×10⁴個/cm² |
換液頻率 | 每3天更換一次培養基 |
培養時間 | 通常可維持1-2周,具體視實驗需求而定 |
分化培養基 | DMEM/F12添加10% FBS及分化因子(如胰島素、地塞米鬆等) |
分化時間 | 通常為7-14天,具體取決於實驗設計 |
關鍵基因 | PPARγ、C/EBPα、FASN、HSL等 |
基因表達監測 | qPCR和Western blot用於檢測關鍵基因的表達水平 |
生物學功能 | 參與(yu) 能量代謝、內(nei) 分泌調節,影響胰島素敏感性、血壓水平等; 對外界機械損傷(shang) 的抵抗力較強,有潛力作為(wei) 軟組織缺損的填充材料 |
細胞活性測定 | CCK-8法用於評估細胞活性 |
油紅O染色 | 用於鑒定成熟脂肪細胞的脂滴形成 |
注意事項 | 建議用多聚賴氨酸 PLL(0.1mg/ml)或明膠(0.1%)對接種培養皿包被處理 |
培養教程
小鼠原代前脂肪細胞培養教程
細胞培養
將重懸後的小鼠原代前脂肪細胞以1.5×10⁴個(ge) /cm²的密度接種至培養(yang) 皿或培養(yang) 瓶中。
初始培養(yang) 時,將細胞置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中孵育24小時。
24小時後,用無菌PBS輕輕洗去未貼壁細胞,並更換為(wei) 新鮮完全培養(yang) 基,繼續培養(yang) 小鼠原代前脂肪細胞。
每3天更換培養(yang) 基,確保培養(yang) 環境穩定,同時定期觀察細胞形態和生長狀態。
注意事項
實驗全程需嚴(yan) 格無菌,以防止汙染對小鼠原代前脂肪細胞的影響。
膠原酶溶液的濃度及消化時間需嚴(yan) 格控製,過度消化可能損傷(shang) 細胞,而消化不足會(hui) 影響小鼠原代前脂肪細胞的分離效果。
過濾步驟務必仔細,離心速度應適中,以提高小鼠原代前脂肪細胞的純度並保證其活性。
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參考文獻
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